Диагностика герпеса

Диагностика герпеса основана на проведении классического вирусовыделения на чувствительных клеточных культурах, иммунофлюоресцентным и серологическим методами, проведении кольпоскопического исследования, использования современных молекулярно-биологических методов (ПЦР, дот-гибридизация), что позволяет диагностировать всю группу герпесвирусов, включая ВГЧ-6 и ВГЧ-7 типов.

Методы лабораторной диагностики герпетической инфекции

Показано, что у 76% больных генитальный герпес (ГГ) вызван ВПГ-2, а у 24% - ВПГ-1 типа. Причем ГГ как моноинфекция протекал лишь у 22% больных, в 78% случаев были выявлены микробные ассоциации. У 46% лиц выявлен паразитоценоз, обусловленный двумя возбудителями, в том числе хламидии были выявлены в 40% случаев. Реже в мазках определяли гарднереллы, трихомонады, гонококки.

У 27% больных паразитоценоз был представлен тремя, у 5,2% - четырьмя возбудителями. Причём чаще отмечалось сочетание хламидии с гарднереллами и грибами рода Candida. Эти данные обосновывают необходимость тщательного бактериологического обследования больных ГГ с целью выявления сочетаний патогенных агентов, а также углубленного изучения патогенеза смешанных инфекций урогенитального тракта, что позволит проводить дифференцированную комплексную терапию герпетической инфекции.

Материалы, исследуемые при выделении ВПГ в зависимости от локализации герпетических поражений

Методы лабораторной диагностики цитомегаловирусной инфекции

Методы диагностики вируса опоясывающего герпеса

Лабораторная диагностика инфекции, вызываемой вирусом опоясывающего герпеса

1. определение в жидкости везикул ВИЭФ;
2. cерология: РСК, ИФА, направленные на выявление
3. cерология: ИФА, направленные на выявление IgМ;
4. серология: ИФА, направленные на выявление IgА, IgM.

Методы индикации иммунного ответа инфекции, обусловленной вирусом опоясывающего герпеса

Интерпретация результатов серологического обследования сывороток больных на герпесвирусные инфекции (ИФА)

В таблице представлены основные методы лабораторной диагностики герпесвирусных инфекций, а также рекомендованы биологические материалы, которые исследуются при выделении ВПГ с учетом локализации герпетических поражений

Достоверным является выделение вырусов простого герпеса и ЦМВ с помощью заражения чувствительных клеточных культур. Так, при вирусологическом обследовании 26 больных в период рецидива ВПГ был выделен на чувствительной культуре клеток Vero в 23 случаях (88,4%). В зараженных культурах наблюдалась характерная для ВПГ картина цитопатического действия - образование многоядерных гигантских клеток или скопление округлых и увеличенных в размере клеток в виде гроздьев. В 52,1% случаев уже к 16-24 ч. после заражения можно было обнаружить очаги цитопатического действия вируса. К 48-72 часам инкубации зараженных культур процент материалов, вызывающих специфическую деструкцию клеток, увеличился до 87%. И лишь в 13% случаев положительные результаты были выявлены через 96 часов после заражения и более или при повторном пассировании.

Методы лабораторной диагностики генерализованной герпетической инфекции

Для диагностики инфекционного мононуклеоза (инфекция, вызванная ВЭБ) используют серологические методы. Реакция Пауль-Буннеля с эритроцитами барана, диагностический титр 1:28 и выше при однократном исследовании сыворотки крови, либо 4-кратный прирост антител при обследовании парных сывороток. Используют реакцию Гоффа-Бауэра со взвесью 4% формалинйзированных эритроцитов лошади. Результат учитывают через 2 минуты, при инфекционном мононуклеозе реакция высокоспецифична.

В настоящее время разрабатывается иммуноферментный (ИФА) метод диагностики инфекционного мононуклеоза. При этом антитела классов IgG и IgМ в сыворотке больного определяют путем ее инкубации с лимфобластами, зараженными ВЭБ с последующей обработкой флюоресцирующими антителами. В остром периоде заболевания антитела к вирусному капсидному антигену определяются в титре 1:160 и выше.

При использовании ряда импортных коммерческих тест-систем в ИФА можно выявить: антитела к ант игенам оболочки ВЭБ, антитела к раннему антигену ВЭБ, общие антитела к раннему антигену ВЭБ, определяющиеся в острой фазе заболевания и в ядре и в цитоплазме клетки, и ограниченные антитела к раннему ВЭБ, определяющиеся в острой фазе заболевания и в ядре и в цитоплазме клетки, ограниченные антитела к раннему антигену ВЭБ, определяющиеся в разгар заболевания только в цитоплазме клетки, и антитела к ядерному антигену ВЭБ. Использование данных тест-систем позволяет проводить дифференциальную диагностику ряда заболеваний, связанных с ВЭБ.

После положительной ИФА, выявившей антитела к ВЭБ, ставят подтверждающую реакцию иммуноблотинга, в которой определяют наличие антител к отдельным маркерным белкам ВЭБ (р-протеины): р23, р54, р72 (наличие этого белка указывает на возможность размножения ВЭБ), р 138. Указанные выше лабораторные методы используют и для контроля эффективности лечения.

Чувствительность вирусологических методов 85-100%, специфичность 100%, время исследования 2-5 дней. Часто в практической работе используется метод прямой иммунофлюоресценции (ПИФ) с поликлональными или моноклональными антителами против ВПГ-1 и ВПГ-2. Метод ПИФ достаточно легко воспроизводим в обычной клинической лаборатории, не является дорогостоящим, чувствительность выше 80%, специфичность 90-95%. При иммунофлюоресцентной микроскопии выявляли наличие цитоплазматических включений, морфологические особенности, процент инфицированных клеток в мазках-соскобах из уретры, цервикального канала, шейки матки, прямой кишки.

Метод ПИФ дает представление о морфологических свойствах клеток и изменении локализации антигенов ВПГ. Кроме прямых признаков поражения клеток вирусами герпеса (обнаружение специфического свечения) имеются косвенные признаки герпетической инфекции по данным ПИФ:

• агрегация ядерного вещества, отслаивание кариолеммы;
• наличие т. н. ядер-«дырок», когда от ядра клетки остается только одна кариолемма;
• наличие внутриядерных включений - тельца Каудри.

При постановке ПИФ врач получает не только качественную, но и количественную оценку состояния инфицированных клеток, что нами было использовано для оценки эффективности проводимой противовирусной терапии ацикловиром (АЦ). Так, 80 больных простым генитальным герпесом (ГГ) обследованы методом ПИФ в динамике. Показано, что если до лечения ацикловиром в мазках 88% больных был высокий процент инфицированных клеток (50-75% и выше), то после одного курса ацикловиром в мазках 44% больных выявлялись здоровые клетки, в 31% случаев отмечены единичные инфицированные клетки и у 25% больных было до 10% инфицированных клеток.

Содержание инфицированных клеток в мазках (реакция ПИФ) больных генитальным герпесом, леченных ацикловиром

Используя многие годы ПИФ и метод дот-гибридизации, отмечено почти в 100% случаев совпадение результатов исследования. Следует отметить, что для повышения надежности диагностики ГГ, особенно в случаях наличия субклинических и маломанифестных форм герпеса, рекомендуется использовать в работе 2-3 метода лабораторной диагностики, особенно при обследовании беременных, женщин с неблагополучным акушерским анамнезом, лиц с неуточненным гинекологическим диагнозом.

Так, при ПЦР-диагностике вирусно-бактериальных инфекций урогенитального тракта необходимо проводить оценку полученных положительных результатов с учетом анамнеза, наличия (или отсутствия) конкретных клинических симптомов болезни. Если с помощью ПЦР выявлены хламидии, то в данном случае с большой вероятностью можно говорить об инфицировании и решать соответствующим образом вопросы терапии. В случае обнаружения микоплазм (уреаплазм), являющихся условно-патогенными микроорганизмами, для подтверждения диагноза требуется провести дополнительно культуральные исследования, т. е. посев материала от больного на чувствительные клеточные культуры. Только при получении положительных результатов при культуральном анализе можно говорить о лабораторном подтверждении диагноза микоплазмоза. Этот же метод позволит при необходимости определить и чувствительность выделенных микоплазм к часто используемым лекарственным формам (антибиотикам, фторхинолонам и пр.).

Возможно одномоментное инфицирование несколькими вирусами семейства Неrреsviridae. Нередко мы выявляли инфицирование одного пациента вирусами ВПГ-1, ВПГ-2 и ЦМВ. Значительно чаще инфицированы несколькими вирусами герпеса были пациенты с клинико-лабораторными проявлениями вторичных ИДС (больные онкогематологические, онкологические, ВИЧ-инфицированные). Так, показано, что прогрессирующие при ВИЧ-инфекции клинико-иммунологические нарушения сопровождаются увеличением числа выявляемых методом молекулярной гибридизации герпесвирусов. При этом прогностически наиболее значимым можно считать комплексное одномоментное выявление ДНК ВПГ-1, ЦМВ и ВГЧ-6 типа.

[1], [2], [3]