Диагностика хронической гранулематозной болезни

Диагностика

Диагностика хронической гранулематозной болезни базируется на оценке функциональной активности фагоцитов. Используются следующие тесты:

1. Тест восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). В норме при поглощении фагоцитами желтого красителя нитросинего тетразолия (ИСТ) их метаболическая активность возрастает, при этом НСТ окисляется, а продукты зтой реакции окрашиваются в синий цвет. При нарушении метаболизма фагоцитов интенсивность синего окрашивания снижается.
2. Хемилюминесценция нейтрофилов. Окисление субстрата сопровождается излучением ультрафиолетового света или флуоресценцией, по интенсивности излучения можно судить о функциональной активности фагоцитов.
3. Оценка фагоцитарной активности: способность фагоцитов уничтожать каталазо-позитивные бактерии in vitro.
4. Генетическое обследование пациентов и их семей при выявлении нарушений функциональной активности фагоцитов.

Определение типов и подтипов хронической гранулематозной болезни

Для определения типов и подтипов хронической гранулематозной болезни, как правило, используется иммуно-блоттинг с использованием антител ко всем 4 компонентам НАДФ-оксидазы. Если один из цитозольных компонентов (р47^phax или p67^phax) отсутствует в блоте, это указывает на мутацию в соответствующем гене, тогда как при отсутствии одного из мембранных компонентов (gр91^phax или р22^phax) другой также не определяется, т.к. субъединицы стабилизируют друг друга для полного созревания и экспрессии. Ряд исследователей используют цитофлоуметрию с применением анти-цитохром p558 антител для определения gp91^phax/p22^phax нa поверхности нейтрофилов. В конечном итоге диагноз подтверждается выявление мутации соответствующего гена.

Пренатальная диагностика хронической гранулематозной болезни

До того, как стало возможным использование молекулярно-генетических технологий, пренатальная диагностика хронической гранулематозной болезни осуществлялась путем определение НАДФ-оксидазной активности нейтрофилов крови плода, производился забор пуповинной крови посредством фетоскопии на 16-18 неделе гестации. В настоящее время проводится ДНК-анализ клеток амниотической жидкости или хорионических ворсинок для поиска специфических дефектов генов с помощью Southern-блоттинга, полимеразной цепной реакции и исследованием полиморфизма длины фрагментов рестрикции, что является более надежным методом и дает возможность постановки диагноза на более ранних сроках беременности.